Hotstart Taq DNA полимерасы
Hot Start Taq DNA полимерасы (антитела модификациясе) - 5 ′ → 3 ′ полимераз активлыгы һәм 5´ флэп эндонуклази активлыгы булган Термус акваториясе YT-1 from кайнар старт термостлы ДНК полимерасы.Так ДНК полимеразы - Так ДНК полимерасы, ул термолабил Так антителалары белән үзгәртелгән.Антитело модификациясе PCR үзенчәлеген, сизгерлеген, уңышын арттырды.
Компонентлар
| Компонент | HC1012А-01 | HC1012А-02 | HC1012А-03 | HC1012А-04 |
| 5 × HC Так Буфер | 4 × 1 мл | 4 × 10 мл | 4 × 50 мл | 5 × 400 мл |
| Кайнар Старт Так ДНК Полимерасы (Антитело үзгәртелде) (5 U / μL) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 10 × 5 мл |
Кушымталар
10 мм Tris-HCl (pH 7,4 25 ℃), 100 мм KCl, 0,1 мм EDTA, 1 мм дитиотрейтол, 0,5% 20 арасында, 0,5% IGEPALCA-630 һәм 50% Глицерол.
Саклау торышы
0 ° C астында транспорт һәм -25 ° C ~ -15 ° C сакланырга тиеш.
Берәмлек төшенчәсе
Бер агрегат фермент күләме дип билгеләнә, 15 нмол dNTP кислотасы эри торган материалга 30 минутта 75 ° C.
Сыйфат белән идарә итү
1.Endэшчәнлек:4 μг pUC19 ДНК белән 20 У ферментның инкубациясе 4 at 37 сәгатьтә 37 at гель электрофорезы белән билгеләнгән ДНКның деградациясенә китермәде.
2.5 кб Ламбда PCR:25 цикллы Ламбда ДНКны көчәйтүнең 25 циклы, 200 µM dNTP һәм 0,2 µM праймерлары булганда 1,25 берәмлек Так ДНК Полимеразы белән көтелгән 5 кб продуктка китерә.
3.Эшчәнлек:Минимум 12,5 U Так ДНК Полимеразын үз эченә алган 50 µл реакция инкубациясе 10 нмол 5´-FAM олигонуклеотид белән 30 минутта 37 atта ачыкланмаган деградация китерми.
4.RNase эшчәнлеге:20 µ ферментны үз эченә алган 1 μг РНК транскрипциясе булган 10 µL реакция инкубациясе 37 ° C тәүлек эчендә РНКның гель электрофорезы белән билгеләнгән деградациясенә китермәде.
5.Atылылык инакивациясе:No.к.
Реакция системасы
| Компонентлар | Том |
| Шаблон ДНКa | өстәмә |
| 10 μM Алга Праймер | 0,5 μЛ |
| 10 μM Кире Пример | 0,5 μЛ |
| dNTP Микс (һәрберсе 10мМ) | 0,5 μЛ |
| 5 × HC Так Буфер | 5 μЛ |
| Так ДНК полимерасыб(5U / μL) | 0.125 μЛ |
| Нуклеизсыз су | 25 μЛ кадәр |
Искәрмәләр:
1) а.
| ДНК | Күләм |
| Геномик | 1 нг-1 μг |
| Плазмид яки Вирус | 1 пг-1 нг |
2) б.Так ДНК Полимеразының оптималь концентрациясе махсус кушымталарда 5-50 берәмлек / млдан (0,1-0,5 берәмлек / 25 µЛ реакция) булырга мөмкин.
Rылылык велосипед протоколы
PCR
| Адым | Температура(° C.) | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурацияa | 95 ℃ | 1-3мин | - |
| Денатурация | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 цикл |
| Аннальингб | 45-68 ℃ | 15-60 с | |
| Киңәйтү | 68 ℃ | 1кб / мин | |
| Соңгы киңәйтү | 68 ℃ | 5мин | - |
Искәрмәләр:
1) Күпчелек көчәйтү өчен 95 минутта 1 минутның башлангыч денатурасы җитә.Авыр шаблоннар өчен, 95 ° C температурада 2-3 минут озынрак денатурация тәкъдим ителә.PCR колониясе белән, 95 ° C температурада башлангыч 5минат денатурация тәкъдим ителә.
2) Анналь адым гадәттә 15-60 с.Аннальинг температурасы ТМ пример парына нигезләнгән һәм гадәттә 45-68 is.
