Температурага сизгер UNG
Температурага сизгер UNG (TS-UNG) - Э.Колидагы рекомбинант экспрессия белән алынган.Фермент урасил булган бер һәм ике катлы ДНКдан ирекле урасил чыгаруны катализацияли һәм РНКга каршы актив түгел.Э. coli ген чыгышы буенча гадәти UNG ферменты белән чагыштырганда, TS-UNG ферменты түбән температурада (20 ℃ ~ 37 ℃) активрак һәм температурага сизгер һәм җиңел инактив булмаган (50 ℃), DUTP булган көчәйткечнең бозылуыннан саклый. бүлмә температурасында продуктлар, гадәти UNG ферментын инакивацияләгәннән соң калырга мөмкин.Шуңа күрә, TS-UNG ферменты PCR пычрануны профилактикалау өчен яраклы гына түгел, ә RT-PCR көчәйтү программасы белән дә туры килә һәм RT-PCR пычрануны профилактикалау реакциясендә кулланыла ала.
Тәкъдим ителгән гариза
Пычратуны профилактикалау көчәйтү
Саклау торышы
Озак вакыт саклау өчен -20 ° C, кулланганчы яхшылап кушылырга, еш туңудан сакланырга кирәк.
Саклау буферы
20 мм Tris-HCl (pH 7.5), 100 мм NaCl, 0,1 мм EDTA, 1 мм DTT, стабилизатор, 50% Глицерол.
Берәмлек төшенчәсе
1µг бер полосалы ДНКны деградацияләү өчен кирәк булган фермент күләме 37 ° C тәүлек эчендә 1 сәгать эчендә DU нигезләре булган 1 берәмлек (U).
Сыйфат белән идарә итү
1.SDS-PAGE электрофоретик чисталыгы 98% тан зуррак
2.Деградация эшчәнлеге, партиядән-партиягә контроль, тотрыклылык
3.Экзоген нуклеаз эшчәнлеге юк, экзоген эндонуклаз яки экзонуклаз пычрануы юк.
Инструкция
| Компонентлар | Күләм (μL) | Соңгы концентрация |
| 10 × PCR буферы (dNTP бушлай, Mg²+бушлай) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP алыштырыгыз) | - | 200-600 μM |
| 25 мм MgCl2 | 2-8 μЛ | 1-4 мм |
| 5 U / μL Так | 0.25 | 1.25 U. |
| 1 U / μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0.5) | 0,5 У (0,1-0.5У) |
| 25 × Пример Микса | 2 | 1 × |
| Шаблон | - | Μ 1μg / реакция |
| ddH₂O | 50 яшькә кадәр | - |
Искәрмә: а: qPCR / qRT-PCR өчен кулланылса, реакция системасына флуоресцент зонасы кушылырга тиеш.Гадәттә, 0,2 μM соңгы пример концентрациясе яхшы нәтиҗәләр бирә ала;реакция эше начар булганда, пример концентрациясе 0,2-1 мм диапазонында көйләнергә мөмкин.Гадәттә, зонаның концентрациясе 0,1-0,3 μМ диапазонында оптимальләштерелгән.Концентрация градиент экспериментлары праймер һәм зондның иң яхшы комбинациясен табу өчен үткәрелергә мөмкин.
Искәрмәләр
1.TS-UNG ферментының оптималь реакция температурасы чагыштырмача түбән, һәм ул 20 ℃ ~ 37 range диапазонында оптимальләштерелергә мөмкин, фермент дозасы һәм реакция вакыты 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ диапазонында оптимальләштерелергә мөмкин. 10 мин;һәм фермент кире транскрипция процессында активсыз булырга мөмкин.
2.PCR һәм RT-PCR пычрануны булдырмас өчен яраклы.
3.Еш кына туңдырудан сакланыгыз, зур температураның үзгәрүенә юл куймагыз.
4.Көчләндерелергә тиешле төрле геннар DUTP-ның төрле куллану эффективлыгына һәм UNG ферментына сизгерлегенә ия, шуңа күрә, UNG системасын куллану ачыклау сизгерлегенең кимүенә китерсә, реакция системасы көйләнергә һәм оптимальләштерелергә тиеш, техник ярдәм кирәк булса, элемтәгә керегез безнең компания.
