Rnase ингибиторы
Murine RNase ингибиторы - рекомбинант мурин RNase ингибиторы, E.coliдан күрсәтелгән һәм чистартылган.Ул A, B яки C RNase белән ковалент булмаган бәйләнеш аша 1: 1 нисбәтендә бәйләнә, шуның белән өч ферментның эшчәнлеген тыя һәм РНКны деградациядән саклый.Ләкин, Аспергиллдан RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H яки RNase каршы эффектив түгел.Murine RNase ингибиторы RT-PCR, RT-qPCR һәм IVT mRNA белән сынады, һәм төрле коммерция Кире транскриптазлар, ДНК полимеразлары һәм РНК полимеразалары белән туры килде.
Кеше RNase ингибиторлары белән чагыштырганда, RNase ингибиторында ике цистин юк, алар ингибиторның инактивлашуына китерә торган оксидлашуга бик сизгер.Аны DTTның аз концентрацияләрендә тотрыклы итү (1 ммнан да азрак).Бу үзенчәлек аны реакциядә куллану өчен яраклаштыра, анда DTT концентрацияләре реакциягә тискәре (мәсәлән, Real-time RT-PCR).
Aүтенеч
Бу продукт теләсә нинди экспериментта киң кулланылырга мөмкин, анда RNase интерфейсы РНК деградациясен булдырмаска мөмкин, мәсәлән:
1.CDNA, RT-PCR, RT-qPCR һ.б.ның беренче полосасы синтезы.
2.Витро транскрипция / тәрҗемә вакытында РНКны деградациядән саклый (мәсәлән, витро вирусны күчерү системасы).
3.РНКны аеру һәм чистарту вакытында RNase эшчәнлеген тыю.
Саклау шартлары
Продукция -25 ～ - 15 at сакланырга мөмкин, 2 ел дәвамында.
Саклау буферы
50 мм KCl, 20 мм HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 мм DTT һәм 50% глицерол.
Берәмлекне билгеләү
5нг рибонуклаз A активлыгын 50% ка тыю өчен кирәк булган мурин RNase ингибиторы күләме бер берәмлек (U) итеп билгеләнде.
Протеинның молекуляр авырлыгы
Мурин RNase ингибиторының молекуляр авырлыгы 50 kDa.
Сыйфат белән идарә итү
Экзонуклаз Эшчәнлек:
40 μ мурин RNase ингибиторы белән 1 μг λ -Хинд III ашказаны ДНКны 37 at 16 сәгать эчендә 16 сәгать дәвамында агароза гели электрофорезы белән билгеләнгәнчә бозылмый.
Эндонуклаз эшчәнлеге:
40 U мурин RNase ингибиторы 1μ г λ ДНК белән 37 at 16 сәгать эчендә агароза гели электрофорезы белән билгеләнгәнчә деградация китерми.
Ник Эшчәнлек:
40U мурин RNase ингибиторы 1μ g pBR322 белән 37 at 16 сәгатьтә 16 сәгать дәвамында агароза гели электрофорезы белән билгеләнгән деградация китерми.
RNase Эшчәнлек:
40U мурин RNase ингибиторы 1,6μ г MS2 РНК белән 4 сәгатьтә 37 at өчен агароза гели электрофорезы белән билгеләнгәнчә деградация китерми.
E.coli DNA:
40 U мурин RNase ингибиторы, E. coli 16S rRNA локусы өчен махсус праймериз белән TaqMan qPCR кулланып, E. coli геном ДНК булуы өчен тикшерелә.E. coli геномик ДНК пычрануы ≤ 0,1 pg / 40 U.
Notes
1. Көчле осылу яки селкетү ферментларның инакивациясенә китерәчәк.
2.Бу оптималь температура диапазоны ингибитор 25-55 was иде, һәм ул 65 ℃ һәм аннан да югарыда актив булмаган.
3. RNase H, RNase 1 һәм RNase T1 эшчәнлеге RNase ингибиторы белән тыелмаган.
4. RNase эшчәнлеген тыю киң pH диапазонында табылды (pH 5-9 барысы да актив иде), һәм иң югары активлык pH 7-8 дәрәҗәсендә күзәтелде.
5. Рибонуклеазлар гадәттә денатурация шартларында активлыкны саклаганлыктан, рибонуклаз белән катлауланган RNase Inhibitor молекулаларын денатурацияләүдән сакланырга кирәк.Актив рибонуклазны чыгармас өчен, 50 ° C-тан артык температура һәм карбамид яки башка денатуратор агентларның югары концентрациясеннән сакланырга кирәк.
