DNase I (Rnase Free) (5у / ул)
Мәче No: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) - бер яки ике катлы ДНКны сеңдерә ала торган эндодоксирибонуклаз.Моносоксинуклеотидлар яки 5 яки терминалдагы фосфат төркемнәре белән бер яки ике катлы олигодоксинуклеотидлар чыгару өчен фосфодиестер бәйләнешләрен таный һәм өзә, 3'терминалда гидроксил.DNase I эшчәнлеге Ca белән бәйле2+һәм Mn кебек дивалент металл ионнары белән активлаштырырга мөмкин2+һәм Zn2+.5 мм Ca.2+ферментны гидролиздан саклый.Мг булганда2+, фермент очраклы рәвештә ДНКның теләсә нинди сайтын таный ала.Mn катнашында2+, ДНКның ике полосасы бер үк вакытта танылырга һәм ярылырга мөмкин, яссы ДНК фрагментлары яки 1-2 нуклеотидлар белән ябыштырылган ДНК фрагментлары.
Компонентлар
| Исем | 0.1КУ | 1КУ | 5 КУ | 50 КУ |
| DNase I, RNaseсыз | 20μL | 200μL | 1мл | 10 мл |
| 10 × DNase I Буфер | 1мл | 1мл | 5 × 1мл | 5 × 10 мл |
Саклау шартлары
Саклау өчен -25 ℃ ~ -15;;Боз пакетлары астында транспорт.
Инструкция
1. Түбәндә күрсәтелгән пропорцияләр буенча RNaseсыз трубада реакция чишелешен әзерләгез:
| Компонент | Том |
| РНК | X µg |
| 10 × DNase I Буфер | 1μL |
| DNase I, RNaseсыз (5U / μL) | Rg RNA① өчен 1 U. |
| ddH2O | 10μL кадәр |
Искәрмә: DN РНК күләменә карап өстәргә кирәк булган DNase I күләмен исәпләгез.
2. 37 15 15 минутка;
3. 2,5 мм ~ 5ммның соңгы концентрациясенә 0,5М ЭДТА кушыгыз, реакцияне туктатыр өчен 65 минутта 10 минутта җылытыгыз.Ampleрнәк кире транскрипция кебек киләсе реакция өчен турыдан-туры кулланылырга мөмкинэксперимент.
Берәмлек төшенчәсе
Бер агрегат 1µg pBR322ны тулысынча деградацияләүче фермент күләме дип билгеләнәДНК 10 минутта 37 at.
Сыйфат белән идарә итү
RNase:5U DNase I 1,6µg MS2 RNA белән 4 сәгатьтә 37 at 37 деградация китермиагароза гели электрофорезы белән билгеләнә.
Искәрмәләр
1. Зинһар, үзегез 0.5MEDTA әзерләгез.
2. µU РНК өчен 1U DNase I кулланыгыз.Ләкин, РНК 1µгдан ким булса, 1U DNase I кулланыгыз.
3. Зинһар, эш вакытында ферментны боз өстенә куегыз.
