Протеиназ К (лиофилизацияләнгән порошок)
Мәче No: HC4500A
Протеиназ К - киң субстрат үзенчәлеге булган тотрыклы серин протеазы.Туган дәүләттә хәтта юу чаралары булганда да күп протеиннарны киметә.Кристалл һәм молекуляр структура тикшеренүләреннән алынган дәлилләр ферментның субтилисиннар гаиләсенә керүен күрсәтә, актив сайт катализатор өчлеге (Asp)39- Аның69- Сер224).Чокырның төп мәйданы - алифатик һәм хуш исле аминокислоталарның карбоксил группасына кушылган пептид бәйләнеше.Бу гадәттә аның киңлеге өчен кулланылаүзенчәлек.
Саклау шартлары
2-8 ℃ кыска вакытлы саклау, -25 ~ -15 ℃ озак вакытлы саклау.Коры порошок статусы -25 ~ -15 3 3 ел дәвамында;фермент порошогы тиешле күләмдә эретелергә тиеш.
Спецификация
| Күренеш | Ак-ак аморф лиофилизацияләнгән порошок |
| Эшчәнлек | ≥30 U / мг |
| DNase | Беркем дә табылмады |
| RNase | Беркем дә табылмады |
Сыйфатлар
| EC саны | 3.4.21.64 (Тритирахий альбомыннан рекомбинант) |
| Молекуляр авырлык | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Изоэлектрик нокта | 7.81 |
| Оптималь рН | 7.0-12.0 1 нче рәсем |
| Оптималь температура | 65 ℃ 2 нче рәсем |
| рН тотрыклылыгы | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16с) 3 нче рәсем |
| Rылылык тотрыклылыгы | 50 астыннан (pH 8.0, 30мин) 4 нче рәсем |
| Активаторлар | SDS, карбамид |
| Ингибиторлар | Диисопропил флюорофосфат;фенилметилсульфонил фторид |
Кушымталар
1. Генетик диагностика комплекты
2. РНК һәм ДНК чыгару комплектлары
3. Протеин булмаган компонентларны тукымалардан чыгару, ДНК вакциналары һәм гепарин әзерләү кебек протеин пычракларының деградациясе.
4. Хромосома ДНКсын импульслы электрофорез белән әзерләү
5. Көнбатыш блот
6. Витро диагностикасында энзиматик гликозилатланган альбумин реагентлары
Саклык чаралары
Кулланганда яки үлчәгәндә саклагыч перчаткалар һәм күзлекләр киегез, кулланганнан соң яхшы җилләтеп торыгыз.Бу продукт тире аллергик реакциясенә һәм күзнең җитди ачуына китерергә мөмкин.Әгәр дә сулыш алса, бу аллергия яки астма симптомнары яки диспнея китерергә мөмкин.Сулыш алуда ачу китерергә мөмкин.
Сорау
Берәмлекне билгеләү
Бер агрегат (U) түбәндәге шартларда минутына 1 ммол тиросин чыгару өчен казинаны гидролизлау өчен кирәк булган фермент күләме дип билгеләнә.
Реагентлар әзерләү
I реагенты: 1г сөт казинасы 50мл 0,1М натрий фосфат эремәсендә (pH 8.0) эретелгән, 65-70 ℃ суда 15 минутка инкубацияләнгән, кушылган һәм эретелгән, су белән суытылган, натрий гидроксиды pH 8.0 белән көйләнгән, һәм күләм күләме 100мл.
II реагент: 0,1М трихлороацетик кислотасы, 0,2М натрий асетат, 0,3М кислотасы.
III реагент: 0,4М На2CO3чишелеш.
IV реагент: Форинт реагенты чиста су белән 5 тапкыр эретелгән.
Реагент V: фермент эретүче: 0,1М натрий фосфат эремәсе (pH 8.0).
VI реагент: тиросин эремәсе: 0, 0,005, 0.025, 0.05, 0.075, 0,1, 0,25 умол / мл тиросин 0,2М HCL белән эретелгән.
Процедура
1. 0,5мл реагент I 37 to кадәр алдан җылытыла, 0,5мл фермент эремәсе кушыгыз, яхшылап кушылыгыз, 10 минут эчендә 37 at инкубацияләгез.
2. Реакцияне туктату, яхшылап катнашу һәм 30 минут дәвамында инкубацияне дәвам итү өчен 1 мл реагент II кушыгыз.
3. reactionентрифугат реакция чишелеше.
4. 0,5мл супернатант алыгыз, 2,5мл реагент III, 0,5мл реагент IV кушыгыз, яхшылап кушыгыз һәм 30 минутта 37 at инкубацияләгез.
5. ОД660ОД дип билгеләнде1;буш контроль төркем: ОДны билгеләү өчен фермент эремәсен алыштыру өчен 0,5мл реагент V кулланыла660ОД2, ΔOD = OD1-OD2.
6. Л.660L-тиросинның төрле концентрациясе өчен, аннары Y = kX + b стандарт кәкре алынган, монда Y - Лирозин концентрациясе, X - OD600.
Хисаплау
2: Реакция эремәсенең гомуми күләме (мл)
0,5: Фермент эремәсе күләме (мл)
0,5: Хромоген билгеләүдә кулланылган реакция сыеклык күләме (мл)
10: Реакция вакыты (мин)
Df: Күп тапкыр эретү
C: Фермент концентрациясе (мг / мл)
Белешмәләр
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972); 23: 77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Биофиз.Рез.Коммун.(1971); 44: 513.
3. Хилц, Х.һ.б.,EUR.Дж. Биохим.(1975); 56: 103-108.
4. Самбрук Джet ал., Молекуляр клонлау: Лаборатория кулланмасы, 2 нче басма, Салкын Чишмә Харборы Лаборатория Пресс, Салкын Чишмә Харборы (1989).
Оптималь температура
20 мм К-фосфат буфер pH 8.0 реакциясе.Фермент концентрациясе: 1мг / мл
3 р Тотрыклылык
25 ℃, 50мМ буфер эремәсе белән 16 с-эшкәртү: pH 4.5-5.5, Ацетат;pH 6.0-8.0, На-фосфат;pH 8.0-9.0, Tris-HCL.pH 9.0-12.5, Гликин-NaOH.Фермент концентрациясе: 1мг / мл
4 нче рәсем тотрыклылык
50мм Tris-HCL буферы белән 30 мин-эшкәртү, pH 8.0.Фермент концентрациясе: 1мг / мл
5 нче рәсем стабилиty at 25 ℃
