Bst 2.0 ДНК полимерасы (Глицерол бушлай)
Bst DNA полимераз V2 Bacillus stearothermophilus DNA полимераз I-дән алынган, аның 5 ′ → 3 ′ ДНК полимераз активлыгы һәм чылбырны алыштыру активлыгы бар, ләкин 5 ′ → 3 ′ экзонуклаз активлыгы юк.Bst DNA Полимераз V2 полоса-күчерү, изотермаль көчәйтү лампасы (Loop арадаш изотермаль көчәйтү) һәм тиз эзлеклелек өчен бик уңайлы.
Компонентлар
| Компонент | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNAполимераз V2 (Глицеролсыз) (8U / μL) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10 × HC Bst V2 буфер | 1,5 мл | 2 × 1,5 мл | 3 × 10 мл |
| MgSO4(100мМ) | 1,5 мл | 2 × 1,5 мл | 2 × 10 мл |
Кушымталар
1. Ламп изотермаль көчәйтү
2.DNA полосасы бер күчерү реакциясе
3. Gгары GC ген эзлеклелеге
4. Нанограмма дәрәҗәсенең ДНК эзлеклелеге.
Саклау торышы
0 ° C астында транспорт һәм -25 ° C ~ -15 ° C сакланырга тиеш.
Берәмлек төшенчәсе
Бер агрегат 25 нмол dNTPны кислотада эри торган материалга 30 минутта 65 ° C температурада кертә торган фермент күләме дип билгеләнә.
Сыйфат белән идарә итү
1.Протеин чисталыгын тикшерү (SDS-PAGE):Bst DNA полимераз V2 чисталыгы ≥99%, Coomassie Blue ачыклау ярдәмендә SDS-PAGE анализы белән билгеләнә.
2.Эшчәнлек:50 μL реакция инкубациясе, минимум 8 U Bst ДНК полимераз V2 белән 1 μg λ -Hind Ⅲ 16 сәгать дәвамында ДНКны 37 Ⅲ ашату, билгеләнгән деградациягә китерми.
3.Никаз эшчәнлеге:50 μL реакция инкубациясе минимум 8 U Bst ДНК полимераз V2 булган 1 μg pBR322 ДНК белән 16 сәг.
4.RNase эшчәнлеге:50 μL реакция инкубациясе минимум 8 U Bst DNA полимераз V2 булган 1,6 μg MS2 RNA белән 16 ° 37 градус җылылыкта 16 сәгать дәвамында инкубация билгеләнгәнчә деградациягә китерми.
5.E. coli DNA:120 U of Bst DNA полимераз V2, E. coli 16S rRNA локусы өчен махсус праймериз белән TaqMan qPCR кулланып, E. coli геномик ДНК булуы өчен тикшерелә.E. coli геномик ДНК пычрануы ≤1 Күчермә.
Лампа реакциясе
| Компонентлар | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 буфер | 2,5 μЛ |
| MgSO4 (100мМ) | 1,5 μЛ |
| dNTP (һәрберсе 10мМ) | 3,5 μЛ |
| SYTO ™ 16 Яшел (25 ×)a | 1,0 μЛ |
| Пример катнашмасыb | 6 μЛ |
| Bst DNA полимераз V2 (Глицеролсыз) (8 U / uL) | 1 μЛ |
| Шаблон | × μL |
| ddH₂O | 25 μЛ кадәр |
Искәрмәләр:
1) а.SYTOTM 16 Яшел (25 ×): Эксперимент ихтыяҗлары буенча, башка буяулар алмаштыргыч буларак кулланылырга мөмкин;
2) б.Пример катнашмасы: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB һәм башка томнарны кушып алынган.
Реакция һәм шарт
1 × HC Bst V2 Буфер, инкубация температурасы 60 ° C белән 65 ° C арасында.
Atылылык инакивациясе
80 ° C ， 20мин
