2 × HiF Taq плюс Мастер Микс
Мәче No: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Буяу белән) - плюс HIF DNA полимерасы, dNTP һәм оптимальләштерелгән буфер булган 2 × премикслы чишелеш.Бүлмә температурасында ике моноклональ антитела, полимераз активлыгын һәм 3 ′ → 5′exonuclease активлыгын мастер-катнашмага җиңел һәм югары специаль Hot Start PCR өчен кушыла.Ферментка озын фрагмент көчәйтү көче бирү өчен, киңәйтү факторы кушыла, көчәйтүнең озынлыгы 13 кб га кадәр, ферментның 5 ′ → 3 ′ ДНК полимераз активлыгы һәм 3 ′ → 5 ′ экзонуклаз активлыгы, аның тугрылыгы Так ДНК полимеразыннан 83 тапкыр, бу гади ДНК полимеразыннан 9 тапкырга күбрәк.Бу катлаулы шаблоннарны көчәйтү өчен яраклы, көчәйтү продукты - төгәл бетү.
2 × HIF Taq плюс Мастер Микс (Буяу белән) тиз һәм җиңел, югары сизгерлек, көчле үзенчәлек, яхшы тотрыклылык һ.б. өстенлекләренә ия, реакция системасына праймерлар һәм шаблоннар өстәргә кирәк, һәм алар икесен көчәйтергә мөмкин. адым протоколы, эксперименталь адымнарны гадиләштерү һәм вакытны саклау.Бу продуктта электрофорез индикатор буяулары бар, һәм PCR продуктлары турыдан-туры электрофорез өчен кулланылырга мөмкин.Моннан тыш, продукт шулай ук махсус саклагычны үз эченә ала, шуңа күрә мастер катнашма кат-кат туңганнан соң тотрыклы активлыкны саклый ала.
Саклау шартлары
Продукция -25 ~ -15 at 1 ел сакланырга тиеш.
Характеристикалар
| Продукция спецификасы | Мастер Микс |
| Концентрация | 2 × |
| Кайнар старт | Эчке кайнар старт |
| Overзгәртеп кору | Блант |
| Реакция тизлеге | Тиз |
| Размер (соңгы продукт) | 13 кб кадәр |
| Транспорт шартлары | Коры боз |
| Продукция төре | Highгары тугрылыклы PCR премикслары |
Инструкция
1.PCR реакция системасы
| Компонентлар | Күләм (μL) |
| ДНК шаблоны | Уңайлы |
| Алга праймер (10 μмол / Л) | 2.5 |
| Кире пример (10 μмол / Л) | 2.5 |
| 2 × HIF Taq плюс Мастер Микс | 25 |
| ddH2O | 50 гә кадәр |
2.Төрле шаблоннарны кулланырга тәкъдим ителә
| Шаблон төре | Фрагментларны 1 кбдан 10 кбга кадәр көчәйтегез |
| Геном ДНК | 50ng-200 ng |
| Плазмид яки Вируслы ДНК | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2.5 µL (Соңгы PCR реакция күләменең 10% тан артмагыз) |
3.Көчәйтү протоколы
1) Ике адымлы протокол (катлаулылык шаблоны)
| Cyикл адымы | Темп. | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурация | 98 ℃ | 3 мин | 1 |
| Денатурация | 98 ℃ | 10сек | 30-35 |
| Киңәйтү | 68 ℃ | 30 сек / кб | |
| Соңгы киңәйтү | 72 ℃ | 5 мин | 1 |
2) Өч адымлы протокол (регуляр протокол)
| Cyикл адымы | Темп. | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурация | 98 ℃ | 3 мин | 1 |
| Денатурация | 98 ℃ | 10сек | 30-35 |
| Аннальинг | 60 ℃ | 20 сек | |
| Киңәйтү | 72 ℃ | 30 сек / кб | |
| Соңгы киңәйтү | 72 ℃ | 5 мин | 1 |
3) Градиент протоколы (катлаулы шаблон)
| Cyикл адымы | Температура | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурация | 98 ℃ | 3 мин | 1 |
| Денатурация | 98 ℃ | 10 сек | 15 (1 cycle циклга киметү) |
| Градиент аннальинг | 70-55 ℃ | 20 сек | |
| Киңәйтү | 72 ℃ | 30 сек / кб | |
| Денатурация | 98 ℃ | 10 сек |
20 |
| Аннальинг | 55 ℃ | 20 сек | |
| Киңәйтү | 72 ℃ | 30 сек / кб | |
| Соңгы киңәйтү | 72 ℃ | 5 мин | 1 |
Төрле көчәйтү протоколы буенча үзенчәлекләр
| Протокоl | Ике адым | Өч адым | Градиент аннальинг |
| Спек. | тиз | урта | әкрен |
| Specзенчәлек | биек | урта | биек |
| PCR уңыш | урта | биек | урта |
| Ачыклау дәрәҗәсе | биек | урта | биек |
Искәрмәләр
Сәламәтлекне һәм куркынычсызлыкны тәэмин итү өчен кирәкле PPE, шундый лаборатория пальто һәм перчаткалар киегез!
