Универсаль SYBR GREEN qPCR Премикс (Зәңгәр)
Мәче No: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (буяу нигезендә) - 2 × реаль вакытта санлы PCR көчәйтү өчен алдан чишелеш, югары сизгерлек һәм үзенчәлек белән характерланган, зәңгәр төстә, һәм үрнәк эзләү эффектына ия.Так ДНК полимеразының төп компоненты антителла кайнар старт куллана, үрнәк әзерләү вакытында пример аннализациясе аркасында специаль булмаган көчәйтүне эффектив тоткарлый.Шул ук вакытта, формула PCR реакциясенең көчәйтү эффективлыгын күтәрү һәм төрле GC эчтәлеге белән геннарның көчәйтүен тигезләү өчен этәргеч факторлар өсти, шулай итеп санлы PCR киң санда яхшы сызыклы бәйләнеш ала ала. Төбәк.Бу продукт махсус ROX пассив белешмә буяуны үз эченә ала, ул күпчелек qPCR коралларына кагыла.Төрле коралларда ROX концентрациясен көйләргә кирәк түгел.Көчләндерү өчен реакция системасын әзерләү өчен праймерлар һәм шаблоннар өстәргә кирәк.
Компонентлар
Universal Blue qPCR Master Mix
Саклау шартлары
Продукция боз пакетлары белән җибәрелә һәм -25 ℃ -15 at 18 айда саклана ала.Реакция системасын саклаганда яки әзерләгәндә көчле яктылык нурларыннан сакланырга кирәк.
Спецификация
| Концентрация | 2 × |
| Ачыклау ысулы | SYBR |
| PCR ысулы | qPCR |
| Полимераз | Так ДНК полимерасы |
| Ampleрнәк төре | ДНК |
| Куллану җиһазлары | Күпчелек qPCR кораллары |
| Продукция төре | Реаль вакыттагы флуоресцент санлы PCR өчен SYBR премиксы |
| (Заявка) | Ген белдерү |
Инструкция
1. Реакция системасы
| Компонентлар | Том күләме (μL） | Том күләме (μL） | Соңгы концентрация |
| Универсаль SYBR GREEN qPCR Премикс | 25 | 10 | 1 × |
| Алга Праймер (10μmol / L) | 1 | 0.4 | 0,2μмол / Л. |
| Кире пример (10μmol / L) | 1 | 0.4 | 0,2μмол / Л. |
| ДНК | X | X | |
| ddH2O | 50 гә кадәр | 20 гә кадәр | - |
[Искәрмә]: Көчле селкенүдән артык күперләр булмасын өчен, кулланганчы яхшылап кушыгыз.
а) Праймер концентрациясе: Соңгы пример концентрациясе 0,2μmol / L, һәм шулай ук тиешенчә 0,1 һәм 1,0μmol / L арасында көйләнергә мөмкин.
б) Шаблон концентрациясе: Әгәр шаблон суытылмаган cDNA запас чишелеше булса, кулланылган күләм qPCR реакциясенең гомуми күләменең 1/10 дан артмаска тиеш.
в) Шаблонны эретү: cDNA запас чишелешен 5-10 тапкыр эретергә киңәш ителә.Кушылган шаблонның оптималь күләме көчәйтү ярдәмендә алынган Ct бәясе 20-30 цикл булганда яхшырак.
г) реакция системасы: максатлы ген көчәйтүнең эффективлыгын һәм кабатлануын тәэмин итү өчен 20μL яки 50μL кулланырга киңәш ителә.
д) Система әзерләү: Зинһар, супер чиста эскәмиядә әзерләнегез, киңәшләрне һәм реакция трубаларын нуклеуз калдыкларысыз кулланыгыз.киңәшләрне фильтр патроннары белән кулланырга киңәш ителә.Кросс пычранудан һәм аэрозол белән пычранудан сакланыгыз.
2.Реакция программасы
Стандарт программа
| Cyикл адымы | Темп. | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурация | 95 ℃ | 2 мин | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10 сек | 40 |
| Аннальинг / киңәйтү | 60 ℃ | 30 сек ★ | |
| Эретү этапы | Инструмент җитешсезлекләре | 1 | |
Тиз программа
| Cyикл адымы | Темп. | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурация | 95 ℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 3 сек | 40 |
| Аннальинг / киңәйтү | 60 ℃ | 20 сек ★ | |
| Эретү этапы | Инструмент җитешсезлекләре | 1 | |
[Искәрмә]: Тиз программа геннарның күпчелеге өчен яраклы, һәм стандарт программаларны аерым катлаулы икенчел структура геннары өчен сынап карарга мөмкин.
а) Анналь температура һәм вакыт: Зинһар, праймер һәм максатлы ген озынлыгына карап көйләгез.
б) Флуоресцент сигнал алу (★): Зинһар, эксперименталь процедураны корал куллану инструкциясендә таләпләргә туры китереп куегыз.
в) Эретү сызыгы: Инструментның килешү программасы гадәттә кулланылырга мөмкин.
3. Нәтиҗә анализы
Санлы экспериментлар өчен минимум өч биологик реплика кирәк иде.Реакциядән соң көчәйтү сызыгы һәм эретү сызыгы расланырга тиеш.
3.1 Көчләндерү сызыгы:
Стандарт көчәйтү сызыгы S формасында.Санлы анализ Ct бәясе 20-30 арасында төшкәндә иң төгәл. Әгәр Ct бәясе 10дан ким булса, шаблонны эретергә һәм кабат тест үткәрергә кирәк.Ct кыйммәте 30-35 арасында булганда, көчәйтү эффективлыгын яхшырту һәм нәтиҗә анализының төгәллеген тәэмин итү өчен, шаблон концентрациясен яки реакция системасының күләмен арттырырга кирәк.Ct бәясе 35тән артканда, тест нәтиҗәләре санлы рәвештә ген экспрессиясен анализлый алмый, ләкин сыйфатлы анализ өчен кулланырга мөмкин.
3.2 Эретү сызыгы:
Эретү кәкресенең иң югары ноктасы реакция спецификасының яхшы булуын һәм санлы анализ ясарга мөмкинлеген күрсәтә;эретү сызыгы икеләтә яки берничә биеклекне күрсәтсә, санлы анализ ясап булмый.Эретү сызыгы икеләтә биеклекне күрсәтә, һәм максатсыз булмаган биеклекнең пример димеры яки ДНК агароза гели электрофорезы белән махсус булмаган көчәйтү булуын тикшерергә кирәк.Әгәр ул праймер димеры булса, пример концентрациясен киметергә яки югары көчәйтү эффективлыгы белән праймерларны яңадан эшләргә киңәш ителә.Әгәр дә ул специаль булмаган көчәйтү булса, зинһар, аннальинг температурасын арттырыгыз, яки праймерларны спецификация белән яңадан эшләгез.
Искәрмәләр
Сәламәтлекне һәм куркынычсызлыкны тәэмин итү өчен кирәкле PPE, шундый лаборатория пальто һәм перчаткалар киегез！
Бу продукт бары тик тикшерү өчен генә！
