5 × Neoscript Тиз RT-qPCR Премикс плюс-UNG
Мәче No: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) - бер этаплы кире транскрипция һәм санлы PCR (qRT-PCR) өчен яраклы бик тотрыклы бер труба зонасына нигезләнгән катнашма.Ул праймерларны һәм пробларны алдан кушуны хуплый һәм түбән температурада озак сакланганнан соң тотрыклы булып кала.Сынап каралачак үрнәкне кулланганда турыдан-туры өстәргә була, өстәмә труба ачу / торбалар эшләмичә.Бу продукт компонентлар белән тәэмин итә, мәсәлән, кайнар старт ДНК полимерасы, M-MLV, җылылык лабиллы урасил ДНК гликозилазы (TS-UNG), RNase ингибиторы, MgCl2, dNTPлар (dTTP урынына dUTP белән), һәм стабилизаторлар.Генетик үзгәртелгән тиз көчәйтү кире транскриптаз һәм ДНК полимеразы белән PCR көчәйтүне 20-40 минут эчендә тәмамларга мөмкин.Бу реагент qPCR өчен махсус буфер куллана, анти-ингибитор көчәйтү ферментлары һәм UNG ферментлары катнаш ферментлары.Шуңа күрә, ул максатлы геннарны яхшы көчәйтергә һәм PCR калдыклары һәм аэрозол пычрануы аркасында ялган көчәйтүне булдырмаска мөмкин.Бу реагент кулланылган биосистемалар, Эппендорф, Био-Рад һәм Роче кебек җитештерүчеләрнең күпчелек флюоресенция санлы PCR кораллары белән туры килә.
Компонент
1.25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix
2.5 × Neoscript Fast RT Premix Буферы (dUTP)
Саклау шартлары
Барлык компонентлар да озак саклану өчен -20 at, 3 айга кадәр 4 be сакланырга тиеш.Зинһар, эреткәннән соң, центрифуга белән яхшылап кушыгыз.Еш кына туңудан сакланыгыз.
qRT-PCR реакция системасын әзерләү
| Компонентлар | 25μLСистема | 50μLСистема | Соңгы концентрация |
| 5 × Neoscript Fast RT Premix Буферы (dUTP) | 5μL | 10μL | 1 × |
| 25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix | 1μL | 2μL | 1 × |
| 25 × Пример-Проб Миксa | 1μL | 2μL | 1 × |
| Шаблон РНКb | - | - | - |
| ddH2O | 25μL кадәр | 50μL кадәр | - |
1) а. Праймерның соңгы концентрациясе гадәттә 0,2μМ.Яхшырак нәтиҗәләр өчен пример концентрациясе 0,2-1μМ диапазонында оптимальләштерелергә мөмкин.Гадәттә, зонаның концентрациясе 0,1-0.3μM диапазонында оптимальләштерелергә мөмкин.
2) б. Тиз PCR процедурасын кулланганда, праймерларның һәм пробаларның концентрациясен арттыру яхшырак көчәйтү нәтиҗәләренә китерергә мөмкин, һәм аларның катнашуы оптимальләштерелергә тиеш.
3) Төрле үрнәкләрдә ингибиторның төрле төрләре һәм эчтәлеге бар һәм максатлы генның күчерелмә саны бар.Volumeрнәк күләме фактик шарт буенча каралырга тиеш.Кирәк булса, үрнәкне нуклеузсыз су яки TE Буфер белән эретегез.
Реакция С.onditions
| Даими PCR процедурасы | Тиз PCR процедурасы | ||||||
| Процедура | Темп. | Вакыт | Cyикл | Процедура | Темп. | Вакыт | Cyикл |
| Кире транскрипция | 50 ℃ | 10-20мин | 1 | Кире транскрипция | 50 ℃ | 5мин | 1 |
| Полимераз Активлаштыру | 95 ℃ | 1-5мин | 1 | Полимераз Активлаштыру | 95 ℃ | 30с | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10-20с | 40-50 | Денатурация | 95 ℃ | 1-3с | 40-50 |
| Аннальинг һәм Киңәйтү | 56-64 ℃ | 20-60с | Аннальинг һәм Киңәйтү | 56-64 ℃ | 3-20с | ||
Сыйфат белән идарә итү
1.Функцияне ачыклау: qPCRның сизгерлеге, үзенчәлеге һәм кабатлануы.
2.Экзоген нуклеаз активлыгы юк: экзоген эндонуклаз һәм экзонуклаз пычрануы юк.
Искәрмәләр
1.Тиз ДНК полимеразының көчәйтү тизлеге 1 кб / 10с ким түгел.Төрле PCR коралларының төрле җылыту һәм суыту тизлеге, температура белән идарә итү режимнары һәм җылылык үткәрүчәнлеге бар, һәм шулай итеп сезнең пример / зонаның концентрациясен оптимальләштерү һәм махсус PCR инструменты белән берлектә эш итү ысулы кирәк.
2.Бу продукт киң кулланыла, һәм ул югары сизгерлек молекуляр диагностика өчен яраклы.Өч этаплы PCR ысулы түбән анналь температурасы булган примерлар өчен яки 200 ат көченнән озын фрагментларны көчәйтү өчен тәкъдим ителә.
3.Төрле ампликоннар DUTPның төрле куллану эффективлыгына һәм UNGга төрле сизгерлеккә ия булганлыктан, реагентлар оптимизацияләнергә тиеш, UNG системасын кулланганда ачыклау сизгерлеге кимсә.Кирәк булса, техник ярдәм өчен безнең белән элемтәгә керегез.
4.PCR продуктларын күтәрүдән саклану өчен, көчәйтү өчен махсус эксперименталь мәйдан һәм пипетка кирәк.Перчаткалар белән эшләгез һәм еш үзгәрегез, көчәйтелгәннән соң PCR трубасын ачмагыз.
