2 × Sensi туры премикс-UNG (qPCR тикшерү)
Мәче No: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) PCRны турыдан-туры үрнәкләрдән ДНК чыгару яки үрнәк әзерләү өчен эшләнгән.Бу реагент кайнар ДНК полимеразыннан, урасил ДНК гликозилазыннан (UNG), RNase ингибиторы, MgClдан тора.2, санлы PCR (qPCR) өчен, dNTPлар (dTTP урынына dUTP белән), һәм стабилизаторлар.Бу реагент югары ингибитор-толерантлыкны формалаштыра, һәм шулай итеп ул турыдан-туры тамак кабыгы, тәлинкә, коагуляциягә каршы бөтен кан, плазма, һәм ДНК чыгармыйча серум кебек үрнәкләрне ачыклау өчен кулланыла ала.Реагент qPCR өчен буфер куллана, анти-ингибитор ДНК полимеразы һәм УНГ ферментының катнаш ферментлары белән.Шуңа күрә, ул ингибитор булган үрнәкләрдә максатлы геннарның яхшы көчәйтелүен ала һәм PCR калдыклары һәм аэрозол пычрануы аркасында ялган позитив көчәйтүне тыя ала.Бу реагент күпчелек флуоресцент санлы PCR кораллары белән туры килә, мәсәлән, Гамәли биосистемалар, Эппендорф, Био-Рад, Роче һ.б.
Компонентлар
1. 50 × SensiDirect Enzyme / UNG Mix
2. 2 × SensiDirect Premix Буферы (dUTP)
Саклау шартлары
Барлык компонентлар да озак саклану өчен -20 at, 3 айга кадәр 4 be сакланырга тиеш.Зинһар, эреткәннән соң, центрифуга белән яхшылап кушыгыз.Еш кына туңудан сакланыгыз.
Велосипед протоколы
| Адым | Температура | Вакыт | Cyикл |
| Ашкайнату | 50 ℃ | 2мин | 1 |
| Полимеразны активлаштыру | 95 ℃ | 1-5мин | 1 |
| Денатура | 95 ℃ | 10-20с | 40-50 |
| Аннальинг / киңәйтү | 56-64 ℃ | 20-60с |
Пипетинг күрсәтмәләре
| Реагент | Күләм реакция | Реакциягә күләм | Соңгы концентрация |
| 2 × SensiDirect Premix Буферы (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1 × |
| 50 × SensiDirect Enzyme / UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1 × |
| 25 × Пример-Проб Микс1, 2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Ampleрнәк3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Гомуми күләм | 25 μЛ | 50 μЛ | - |
1. Праймерның соңгы концентрациясе гадәттә 0,2μМ.Яхшырак нәтиҗәләр өчен пример концентрациясе 0,2-1μМ диапазонында оптимальләштерелергә мөмкин.
2. Гадәттә, зонд концентрациясе 0,1-0.3μM диапазонында оптимальләштерелергә мөмкин.Пробның оптималь концентрациясе реаль вакытта PCR көчәйтү коралы, тикшерү төре һәм флюоресцент маркировкалау матдәсе белән бәйле.Зинһар, инструмент кулланмасына яки һәр флуоресцент тикшерүнең конкрет таләпләренә мөрәҗәгать итегез.
3. Төрле үрнәкләрдә ингибиторның төрле төрләре һәм эчтәлеге бар, максатлы ген саны күчерелә.Volumeрнәк күләме фактик шарт буенча каралырга тиеш.Кирәк булса, нуклеузсыз су яки TE Буфер кушып, үрнәкне эретегез.
4. Төрле үрнәкләрнең тәкъдим ителгән күләме:
| Ampleрнәк | Бер том өчен 50 μL реакция | Максимум нисбәте |
| Антикоагуляцияләнгән бөтен кан | 2,5 μЛ | 5% |
| Плазма | 15 μЛ | 30% |
| Серум | 10 μЛ | 20% |
| Тамак | 10 μЛ | 20% |
| Тозак | 10 μЛ | 20% |
Сыйфат белән идарә итү
1. Функцияне ачыклау: qPCRның сизгерлеге, үзенчәлеге һәм кабатлануы.
2. Экзоген нуклеаз эшчәнлеге юк: экзоген эндонуклаз һәм экзонуклаз пычрануы юк.
Продукция турында искәрмәләр
1. Бу продукт 1-5 минутта активлашырга мөмкин булган яңа ДНК полимеразының яңа төрен куллана. Аның реакция буферы оптимальләшкәнгә, тикшерү ысулы ярдәмендә икеләтә яки күп флуоресцент санлы PCR өчен кулайрак.
2. Әгәр PCR көчәйтүнең Rn кыйммәте бик түбән булса яки көчәйтү ачыктан-ачык тыелса, үрнәк күләмен киметү, реакция күләмен арттыру яки үрнәкнең элеккеге эремәсе нәтиҗәләрне яхшыртырга мөмкин.
3. Кан, тәлинкә, сидек, тамак селкәсе һ.б. җыю клиник критерий таләпләренә туры килергә тиеш, һәм яңа үрнәк нуклеин кислотасының бозылуына юл куймаска мөмкин.
4. Төрле ампликоннар DUTP өчен куллану эффективлыгы һәм UNGга сизгерлеге булганлыктан, UNG системасын кулланганда ачыклау сизгерлеге кимсә, реагентлар оптимальләштерелергә тиеш.Кирәк булса, техник ярдәм өчен безнең белән элемтәгә керегез.
5. PCR продуктларын бер этаплы реакцияләр арасында көчәйтмәс өчен, көчәйтү өчен махсус эксперименталь мәйдан һәм пипетка кирәк.Перчаткалар белән эшләгез һәм еш үзгәрегез, PCR көчәйтелгәннән соң реакция трубасын ачмагыз.
