UDG / UNG ферментлары
UDG (урасил ДНК гликозилазы) s-DDNA һәм dsDNAдагы урасил базасы белән шикәр-фосфат арка сөяге арасындагы N-гликозидик бәйләнешнең гидролизын катализацияли ала.Ул аэрозол пычрануын җиңел контрольдә тота һәм PCR, qPCR, RT-qPCR һәм LAMP кебек гомуми молекуляр биология системалары өчен яраклы.
Характеристикалар
| Экспресс алып баручы | Рекомбинант Э. coliwith урасил ДНК гликозилаз гены |
| Молекуляр авырлык | 24. 8кДа |
| Чисталык | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Atылылык инакивациясе | 95 ℃, 5 ~ 10 мин |
| Берәмлек төшенчәсе | Бер берәмлек (U) фермент күләме дип билгеләнә, l μg dU булган dsDNA гидролизын 30 минутта 25 at. |
Саклау
Продукция ике ел дәвамында -25 ℃ -15 ° C сакланырга тиеш.
Инструкция
1.PCR реакция катнашмасын түбәндәге система буенча әзерләү
| Компонентлар | Күләм (μL) | Соңгы концентрация |
| 10 × PCR буферы (Mg² + Plus) | 5 | 1 × |
| 25 ммол / LMgCl | 3 | 1,5 ммол / Л. |
| dUTP (10 ммол / Л) | 3 | 0,6 ммол / Л. |
| dCTP / dGTP / dATP / dTTP (10 ммол / Саклау) | 1 | 0,2 ммол / Саклау |
| Шаблон ДНК | X | - |
| Primer1 (10μmol / L) | 2 | 0,4 ммол / Л. |
| Праймер 2 (10μmol / L) | 2 | 0,4 ммол / Л. |
| Так ДНК полимерасы (5 U / μL) | 0. 5 | 0. 05 U / μL |
| Уракил ДНК гликозилазы (UDG / UNG), 1 U / μL | 1 | 1 U / μL |
| ddH₂O | 50 гә кадәр | - |
Тамга: Эксперимент таләпләре буенча, DUTPның соңгы концентрациясе 0,2-0,6 ммол / Л арасында көйләнергә мөмкин, һәм 0,2 ммол / Л dTTP сайлап өстәлергә мөмкин.
2.Көчләндерү процедурасы
| Cyикл адымы | Температура | Вакыт | Cyикллар |
| dU булган шаблон деградациясе | 25 ℃ | 10мин | 1 |
| UDG активлаштыру, шаблон башлангыч денатурация | 95 ℃ | 5 ~ 10мин | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10 сек |
30-35 |
| Аннальинг | 60 ℃ | 20 сек | |
| Киңәйтү | 72 ℃ | 30сек / кб | |
| Соңгы киңәйтү | 72 ℃ | 5 мин | 1 |
Тамга: 25 ° C реакция вакыты эксперимент таләпләренә туры китереп 5-10 минут эчендә көйләнергә мөмкин.
Искәрмәләр
1.UDG күпчелек PCR реакция буферларында актив.
2.Ферментлар кулланылганда боз тартмасында яки боз мунчасында сакланырга тиеш, һәм кулланганнан соң ук 20 ° C температурада сакланырга тиеш.
3.Сәламәтлекне һәм куркынычсызлыкны тәэмин итү өчен кирәкле PPE, шундый лаборатория пальто һәм перчаткалар киегез!
