Уракил ДНК Гликозилаз
Урасил-ДНК гликозилазы (UNG яки UDG) - Э.Колиның рекомбинант клоны, молекуляр авырлыгы 25 кДа.Ул урасил булган бер полосалы һәм ике катлы ДНКдан ирекле урасилның чыгарылышын катализацияли, һәм РНКга каршы актив түгел, һәм PCR көчәйтү продуктларының пычрануыннан сакланырга мөмкин.Эш принцибы нигезендә, PCR реакциясендә dUTP dTTP белән алыштырылса һәм dU нигезләрен үз эченә алган PCR көчәйтү продукты формалашса, фермент U базларының гликозидик бәйләнешен сайлап, ике катлы һәм ике катлы итеп өзә ала. ДНК һәм PCR көчәйтү продуктын деградацияләү.
Тәкъдим ителгән гариза
Пычратуны профилактикалау көчәйтү
Саклау торышы
Озак вакыт саклау өчен -20 ° C, кулланганчы яхшылап кушылырга, еш туңудан сакланырга кирәк.
Саклау буферы
20 мм Tris-HCl (pH 8.0), 150 мм NaCl, 1 мм EDTA, 1 мм DTT, стабилизатор, 50% Глицерол.
Берәмлек төшенчәсе
1µг бер полосалы ДНКны деградацияләү өчен кирәк булган фермент күләме 1 сәг.
Сыйфат белән идарә итү
1.SDS-PAGE электрофоретик чисталыгы 98% тан зуррак
2.Көчәйтү сизгерлеге, партиядән партиягә контроль, тотрыклылык
3.1U UNG 2 мин өчен 50 at эшкәртелгәннән соң, 103 данәдән түбән U булган шаблон тулысынча бозылырга тиеш һәм көчәйтү продукты җитештереп булмый.
4.Экзоген нуклеаз активлыгы юк
Инструкция
| Компонентлар | Күләм (μL) | Соңгы концентрация |
| 10 × PCR буферы (dNTP бушлай, Mg²+бушлай) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP алыштырыгыз) | - | 200-600 μM |
| 25 мм MgCl2 | 2-8 μЛ | 1-4 мм |
| 5 U / μL Так | 0.25 | 1.25 U. |
| 5 U / μL UNG | 0,25 (0,1-0.5) | 0,25 У (0,1-0,5) |
| 25 × Пример Микса | 2 | 1 × |
| Шаблон | - | Μ 1μg / реакция |
| ddH₂O | 50 яшькә кадәр | - |
Тамга: а: qPCR / qRT-PCR өчен кулланылса, реакция системасына флуоресцент зонасы кушылырга тиеш.Гадәттә, 0,2 μM соңгы пример концентрациясе яхшы нәтиҗәләр бирә ала;реакция эше начар булганда, пример концентрациясе 0,2-1 мм диапазонында көйләнергә мөмкин.Гадәттә, зонаның концентрациясе 0,1-0,3 μМ диапазонында оптимальләштерелгән.Концентрация градиент экспериментлары праймер һәм зондның иң яхшы комбинациясен табу өчен үткәрелергә мөмкин.
Искәрмәләр
1.UNG ферменты пычратылган DUTP көчәйтү продуктларын PCR көчәйтү реакциясе алдыннан реакция системасыннан чыгару өчен, аннары продуктның пычрануы аркасында ялган-уңай нәтиҗәләрдән саклану өчен кулланылырга мөмкин.
2.Пычратуга каршы PCR реакциясендә куллану өчен UNG ферменты өчен оптималь температура, гадәттә, 2 мин өчен 50 is;5 минут өчен инактивлаштыру торышы 95 is.
3.Еш кына туңдырудан сакланыгыз, зур температураның үзгәрүенә юл куймагыз.
4.Көчләндерелергә тиешле төрле геннар DUTP-ның төрле куллану эффективлыгына һәм UNG ферментына сизгерлегенә ия, шуңа күрә, UNG системасын куллану ачыклау сизгерлегенең кимүенә китерсә, реакция системасы көйләнергә һәм оптимальләштерелергә тиеш, техник ярдәм кирәк булса, элемтәгә керегез безнең компания.
