Робустарт Так ДНК полимерасы
Робустарт Так ДНК Полимеразы - кайнар ДНК полимеразы.Бу продукт PCR системасын әзерләү һәм көчәйтү процессында примерларның специаль булмаган аннальләшүе яки пример агрегаты аркасында килеп чыккан специаль булмаган реакцияне яхшырак тыя алмый.Шуңа күрә, ул искиткеч үзенчәлеккә ия һәм түбән концентрацияле шаблоннарны көчәйтү өчен эффективрак, һәм ул мультиплекслы PCR көчәйтү реакциясе өчен яраклы.Моннан тыш, бу продукт бик яхшы кулланыла, һәм тотрыклы көчәйтү нәтиҗәләрен төрле PCR реакцияләрендә алырга мөмкин.
Компонентлар
1.5 U / μL Робустарт Так ДНК полимерасы
2.10 × PCR Буфер II (Mg² + бушлай) (өстәмә)
3.25 мм MgCl2(өстәмә)
* 10 × PCR Буфер II (Mg² + бушлай) dNTP һәм Mg² + юк, зинһар, dNTP һәм MgCl өстәгез2реакция системасын әзерләгәндә.
Тәкъдим ителгән кушымталар
1.Тиз көчәйтү.
2.Берничә көчәйтү.
3.Канны, каракларны һәм башка үрнәкләрне турыдан-туры көчәйтү.
4.Сулыш юлларын ачыклау.
Саклау торышы
Озак вакыт саклау өчен -20 ° C, кулланганчы яхшылап кушылырга, еш туңудан сакланырга кирәк.
* Әгәр суыткычтан соң явым-төшем булса, бу нормаль;катнашу һәм куллану алдыннан бүлмә температурасына тигезләнергә киңәш ителә.
Берәмлек төшенчәсе
Бер актив берәмлек (U) 10 нмол дезоксирибонуклеотидны кислотада эри торган материалга кертә торган фермент күләме дип билгеләнә, 74 минутта 30 минут эчендә активлаштырылган лосось спермасы ДНКсын шаблон / праймер итеп куллана.
Сыйфат белән идарә итү
1.SDS-PAGE электрофоретик чисталыгы 98% тан артык.
2.Көчәйтү сизгерлеге, партиядән партиягә контроль, тотрыклылык.
3.Экзоген нуклеаз эшчәнлеге юк, экзоген эндонуклаз яки экзонуклаз пычрануы юк
Инструкция
Реакция урнаштыру
| Компонентлар | Том (μL) | Соңгы концентрация |
| 10 × PCR Буфер II (Mg² + бушлай)a | 5 | 1 × |
| dNTPs (һәр dNTP 10мМ) | 1 | 200 μM |
| 25 мм MgCl2 | 2-8 | 1-4 мм |
| Робустарт Так ДНК полимерасы (5U / μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U. |
| 25 × Пример катнашмасыб | 2 | 1 × |
| Шаблон | - | ＜ 1 μг / реакция |
| ddH2O | 50 яшькә кадәр | - |
Искәрмәләр:
1) а.Буферда dNTP һәм Mg² + юк, зинһар, dNTP һәм MgCl өстәгез2реакция системасын әзерләгәндә.
2) б.QPCR / qRT-PCR өчен кулланылса, реакция системасына флуоресцент зоналар кушылырга тиеш.Гадәттә, 0,2 μM соңгы пример концентрациясе яхшы нәтиҗәләр бирәчәк;реакция эше начар булса, пример концентрациясе 0,2-1 μМ диапазонында көйләнергә мөмкин.Зонд концентрациясе гадәттә 0,1-0,3 μМ диапазонында оптимальләштерелгән.Концентрация градиент экспериментлары праймер һәм зондның иң яхшы комбинациясен табу өчен үткәрелергә мөмкин.
Rылылык велосипед протоколы
| Регуляр PCRпроцесс | |||
| Адым | Температура | Вакыт | Cyикллар |
| Алдан денатурация | 95 ℃ | 1-5 минут | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10-20 сек | 40-50 |
| Аннальинг / киңәйтү | 56-64 ℃ | 20-60 сек | |
| Тиз PCRпроцесс | |||
| Адым | Температура | Вакыт | Cyикллар |
| Алдан денатурация | 95 ℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 1-5 сек | 40-45 |
| Аннальинг / киңәйтү | 56-64 ℃ | 5-20 сек | |
Искәрмәләр
1.Тиз ДНК полимеразының көчәйтү тизлеге 1 кб / 10 сдан ким булмаска тиеш.Температураның күтәрелү һәм төшү темплары, температура белән идарә итү режимы һәм төрле PCR коралларының җылылык үткәрү эффективлыгы төрлечә була, шуңа күрә махсус PCR коралы өчен оптималь реакция шартларын оптимальләштерү тәкъдим ителә.
2.Система югары адаптацияләнгән, югары үзенчәлек һәм сизгерлек белән.
3.Highгары сизгерлек PCR ачыклау реагентлары буларак куллану өчен яраклы, һәм мультиплекслы PCR көчәйтү реакцияләрендә кулланырга мөмкин.
4.5 ′ → 3 ′ полимераз активлыгы, 5 ′ → 3 ′ экзонуклаз активлыгы;3 ′ → 5 ′ экзонуклаз эшчәнлеге юк;тикшерү функциясе юк.
5.PCR һәм RT-PCR сыйфатлы һәм санлы сынау өчен яраклы.
6.PCR продуктының 3 ′ ахыры A, аны турыдан-туры T векторына клонлаштырырга мөмкин.
7.Өч этаплы ысул түбән температуралы праймерларга яки 200 ат көченнән озынрак фрагментларны көчәйтү өчен тәкъдим ителә.
