Протеиназ К NGS (порошок)

Спецификация

Сыйфатлар

Берәмлекне билгеләү

NGS Протеаз Кның бер берәмлеге стандарт билгеләү шартларында 1 μmol L-тиросинга гидролизлау өчен кирәк булган фермент күләме дип билгеләнә.

 Реагентлар әзерләү

I реагент:

Субстрат: 1% кацин сөт эремәсеннән: 1г бовин сөт казинасын 50мл 0,1М натрий фосфат эремәсендә эретегез, pH 8.0, су ваннасында 65-70 ° C 15 минутта җылытыгыз, эретегез, эретегез, су белән салкын, көйләнгән натрий гидроксиды pH 8.0, һәм 100млга эретегез.

II реагент:

TCA эремәсе: 0,1М трихлороацетик кислотасы, 0,2М натрий ацетаты һәм 0,3М кислотасы (авырлыгы 1,64г трихлороацетик кислотасы + 1,64г натрий асетат + 1,724мл кислотасы бер-бер артлы, 50мл деонизацияләнгән су өстәргә, HCl белән pH 4.03 белән эретегез һәм эретегез. 100мл).

III реагент:

0,4 м натрий карбонат эремәсе (авырлыгы 4,24г сусыз натрий карбонаты һәм 100мл суда эри)

IV реагент:

Фолин фенол реагенты: 5 тапкыр деонизацияләнгән су белән эретегез.

V реагенты:

Фермент эретүче: 0,1 М натрий фосфат эремәсе, pH 8.0.

VI реагент:

Л-тиросин стандарт эремәсе: 0, 0,005, 0.025, 0.05, 0.075, 0,1, 0,25 умол / мл L-тиросин 0,2М HCl белән эретелгән.

Процедура

1. UV-Vis спектропотометрын кабызыгыз һәм фотометрик үлчәүне сайлагыз.

2. Дулкын озынлыгын 660нм итеп куегыз.

3. Су мунчасын кабызыгыз, температураны 37 to итеп куегыз, температураның 3-5 минутка үзгәрмәвен тәэмин итегез.

4. 2мл центрифуга трубасында 0,5мл субстратны 10 минутка 37 ℃ су мунчасында җылытагыз.

5. 0,5мл эретелгән фермент эремәсен җылытылган центрифуга трубасына 10 минутка чыгарыгыз.Ферментны буш төркем итеп куегыз.

6. Реакциядән соң ук 1,0 мл TCA реагентын кушыгыз.Яхшылап, 30 минут су ваннасында инкубацияләгез.