Кыргый Так ДНК полимерасы
Так ДНК Полимеразы - 5 ′ → 3 ′ полимераз активлыгы һәм 5´ флэп эндонуклази активлыгы булган Термус су YT-1 термостлы ДНК полимерасы.
Компонентлар
| Компонент | HC1010А-01 | HC1010А-02 | HC1010А-03 | HC1010А-04 |
| 10 × Так буфер | 2 × 1 мл | 2 × 10 мл | 2 × 50 мл | 5 × 200 мл |
| Так ДНК полимерасы (5 U / μL) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5 × 10 мл |
Саклау торышы
0 ° C астында транспорт һәм -25 ° C ~ -15 ° C сакланырга тиеш.
Берәмлек төшенчәсе
Бер агрегат фермент күләме дип билгеләнә, 15 нмол dNTP кислотасы эри торган материалга 30 минутта 75 ° C.
Сыйфат белән идарә итү
1.Протеин чисталыгын тикшерү (SDS-PAGE):Так ДНК полимеразының чисталыгы ≥95% SDS-PAGE анализы белән билгеләнде.
2.Endэшчәнлек:Минимум 5 U Так ДНК полимеразы 1 μг λDNA белән 16 at 37 сәгатьтә 37 at тә ачыкланмаган деградациягә китерми.
3.Эшчәнлек:Минимум 5 U Так ДНК полимеразы белән 1 μг λ -Хинд 16 16 сәгать эчендә ДНКны ашатырга 37 ℃ билгеләнгәнчә деградациягә китерми.
4.Никаз эшчәнлеге:Минимум 5 U Так ДНК полимеразы белән 1 μg pBR322 ДНК белән 16 сәг.
5.RNase эшчәнлеге:Минимум 5 U Так ДНК полимеразы, 1,6 μг MS2 РНК белән 16 сәгать 37 ° C температурада, ачыкланган деградациягә китерми.
6.E. coliДНК:5 U Taq DNA полимеразасы E. coli 16S rRNA локусы өчен махсус праймериз белән TaqMan qPCR кулланып, E. coli геномик ДНК булуы өчен тикшерелә.E. coli геномик ДНК пычрануы ≤1 Күчермә.
7.PCR көчәйтү (5.0 кб Ламбда ДНК)- 25 ngл Ламбда ДНКны үз эченә алган 50 µL реакция, 5 берәмлек Так ДНК Полимерасы белән 25 цикл PCR көчәйтү өчен көтелгән 5.0 кб продуктка китерә.
Реакция урнаштыру
| Компонентлар | Том |
| Шаблон ДНКa | өстәмә |
| 10 μM Алга Праймер | 1 μЛ |
| 10 μM Кире Пример | 1 μЛ |
| dNTP Микс (һәрберсе 10мМ) | 1 μЛ |
| 10 × Так буфер | 5 μЛ |
| Так ДНК полимерасыб | 0,25 μЛ |
| Нуклеизсыз су | 50 μЛ кадәр |
Искәрмәләр:
1) Төрле шаблоннарның оптималь реакция концентрациясе төрле.Түбәндәге таблицада 50 µL реакция системасын тәкъдим ителгән шаблон куллануны күрсәтәләр.
| ДНК | Күләм |
| Геномик | 1 нг-1 μг |
| Плазмид яки Вирус | 1 пг-1 нг |
2) Так ДНК Полимеразының оптималь концентрациясе махсус кушымталарда 0,25 µL ~ 1 µL булырга мөмкин.
РеакцияПрограмма
| Адым | Температура(° C.) | Вакыт | Cyикллар |
| Башлангыч денатурацияa | 95 ℃ | 5мин | - |
| Денатурация | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 цикл |
| Аннальингб | 60 ℃ | 15 с | |
| Киңәйтү | 72 ℃ | 1кб / мин | |
| Соңгы киңәйтү | 72 ℃ | 5мин | - |
Искәрмәләр:
1) Башлангыч денатурация торышы күпчелек көчәйтү реакцияләре өчен яраклы һәм шаблон структурасының катлаулылыгына карап үзгәртелергә мөмкин.Әгәр дә шаблон структурасы катлаулы булса, денатурациягә кадәрге вакыт 5-10 минутка кадәр озайтылырга мөмкин.
2) Аннальинг температурасы праймерның Tm кыйммәте буенча көйләнергә тиеш, ул гадәттә праймерның Tm кыйммәтеннән 3 ~ 5 ℃ түбәнгә куелган;Катлаулы шаблоннар өчен аннальинг температурасын көйләргә һәм эффектив көчәйтүгә ирешү өчен озайту вакытын озайтырга кирәк.
