Тычкан генотиплау комплекты

Мәче No: HCR2021A

Бу продукт тычкан генотипларын тиз ачыклау өчен эшләнгән комплект, шул исәптән ДНК чиста чыгару һәм PCR көчәйтү системасы.Продукция PCR көчәйтү өчен тычкан койрыгыннан, колактан, аяк бармакларыннан һәм башка тукымалардан Lysis Buffer һәм Proteinase k гади ярылганнан соң кулланылырга мөмкин.Төнлә ашкайнату, фенол-хлороформ чыгару яки багананы чистарту юк, бу гади һәм экспериментлар вакытын кыскарта.Продукция 2 кб га кадәр максатлы фрагментларны көчәйтү өчен һәм 3 пар праймер белән мультиплекслы PCR реакцияләрен көчәйтү өчен яраклы.2 × Тычкан тукымасы туры PCR катнашында генетик инженерланган ДНК полимерасы бар, Mg²⁺, югары көчәйтү эффективлыгын һәм ингибитор толерантлыгын тәэмин итү өчен, dNTP һәм оптимальләштерелгән буфер системасы, шулай итеп PCR реакцияләре шаблон һәм праймерлар өстәп һәм продуктны 1 × га регидрацияләү ярдәмендә башкарылырга мөмкин.Бу продукт белән көчәйтелгән PCR продукты 3 ′ очында күренекле "А" базасына ия һәм чистартылганнан соң турыдан-туры TA клонлаштыру өчен кулланыла ала.

Компонентлар

Саклау шартлары

Продукция -25 ~ -15 at 2 ел сакланырга тиеш.Эретелгәннән соң, Лизис Баферы кыска вакытлы куллану өчен 2 ~ 8 at сакланырга мөмкин, һәм кулланганда яхшылап катнашырга.

Кушымта

Бу продукт тычканны анализлау, трансгеник ачыклау, генотип ясау һ.б. өчен яраклы.

Үзенчәлекләр

1.Гади операция: геном ДНКны чыгарырга кирәк түгел;

2.Киң куллану: төрле тычкан тукымаларын турыдан-туры көчәйтү өчен яраклы.

Инструкция

1.Геном ДНК чыгару

1) Лизат әзерләү

Кисем лизаты тычкан үрнәкләре саны буенча әзерләнә (тукымалар лизаты дозасы буенча сайтта әзерләнергә һәм куллану өчен яхшылап катнашырга тиеш), һәм бер үрнәк өчен кирәк булган реагентларның өлеше түбәндәгечә:

2) ampleрнәк әзерләү һәм лизис

Текстны куллану тәкъдим ителә

Чиста центрифуга трубаларында тиешле күләмдә тычкан тукымасы үрнәкләрен алыгыз, һәр центрифуга трубасына 200μL яңа тукымалар лизаты кушыгыз, вортекс һәм селкетегез, аннары 55 in 30 минутта инкубацияләгез, аннары 98 3 3 минутта җылытыгыз.

3) rifентрифугация

Лизатны һәм центрифуга 12 минутта 5 минутка селкетегез.Супернатант PCR көчәйтү өчен шаблон буларак кулланылырга мөмкин.Шаблон саклау өчен кирәк булса, супернатантны башка стериль центрифуга торбасына күчерегез һәм 2 атна эчендә -20 at саклагыз.

2.PCR көчәйтү

2 × тычкан тукымасы туры PCR катнашмасын -20 fromдан алып, бозда эретегез, өскә кушылыгыз һәм PCR реакция системасын түбәндәге таблицага әзерләгез (боз өстендә эшләгез):

Тамга:

а) өстәлгән сумма системаның 1/10 өлешеннән артмаска тиеш, һәм артык күп булса, PCR көчәйтү тыелырга мөмкин.

Тәкъдим ителгән PCR шартлары

Тамга:

а) Аннальинг температурасы: Праймерның Tm кыйммәтенә таянып, аннальинг температурасын примерның кечерәк Tm кыйммәтенә куярга киңәш ителә + 3 ~ 5 ℃.

Гомуми проблемалар һәм чишелешләр

1.Максатлы полосалар юк

1) Артык лизис продукты.Иң тиешле шаблонны сайлагыз, гадәттә системаның 1/10 дан артык түгел;

2) Бик зур үрнәк күләме.Лизатны 10 тапкыр эретегез, аннары көчәйтегез, яисә үрнәк күләмен киметегез һәм яңадан лизизлагыз;

3) Кисем үрнәкләре яңа түгел.Яңа тукымалар үрнәкләрен кулланырга киңәш ителә;

4) Начар пример сыйфаты.Праймерның сыйфатын тикшерү һәм праймериз дизайнын оптимальләштерү өчен көчәйтү өчен геном ДНК кулланыгыз.

2.Конкрет булмаган көчәйтү

1) Анналь температурасы бик түбән һәм цикл саны артык күп.Анналь температураны арттыру һәм цикл санын киметү;

2) Шаблон концентрациясе артык зур.Шаблон күләмен киметү яки көчәйтелгәннән соң шаблонны 10 тапкыр эретү;

3) Начар пример үзенчәлеге.Праймер дизайнын оптимальләштерү.

Искәрмәләр

1.Samрнәкләр арасындагы пычранудан саклану өчен, берничә сайлау коралы әзерләнергә тиеш, һәм корал куллану өслеген 2% натрий гипохлориты эремәсе яки нуклеин кислотасы чистарткыч белән чистартып була.

2.Тычканның яңа тукымаларын кулланырга киңәш ителә, һәм көчәйтү нәтиҗәләренә тәэсир итмәс өчен, сайлау күләме артык зур булырга тиеш түгел.

3.Лизис Бафер еш туңдырудан сакланырга тиеш, һәм кыска вакытлы күп куллану өчен 2 ~ 8 at сакланырга мөмкин.Әгәр дә түбән температурада сакланса, явым-төшем булырга мөмкин, һәм аны кулланганчы тулысынча эретергә кирәк.

4.PCR Mix еш туңдырудан сакланырга тиеш, һәм кыска вакытлы кабат куллану өчен 4 at сакланырга мөмкин.

5.Бу продукт фәнни эксперименталь тикшеренүләр өчен генә, клиник диагностикада яки дәвалауда кулланырга ярамый.