DNase I.

DNase I (Deoxyribonuclease I) - бер яки ике катлы ДНКны сеңдерә ала торган эндодоксирибонуклаз.Моносоксинуклеотидлар яки 5 ′ терминалда фосфат төркемнәре белән бер яки ике катлы олигодоксинуклеотидлар чыгару өчен фосфодиестер бәйләнешләрен таный һәм ярып җибәрә, 3′-терминалда гидроксил.DNase I эшчәнлеге Ca2 + белән бәйле һәм Mn2 + һәм Zn2 + кебек дивалент металл ионнары белән активлашырга мөмкин.5мМ Ca2 + ферментны гидролиздан саклый.Mg2 + булганда, фермент очраклы рәвештә ДНКның теләсә нинди сайтын таный ала.Mn2 + булганда, ДНКның ике полосасы бер үк вакытта танылырга һәм ярылырга мөмкин, яссы ДНК фрагментлары яки 1-2 нуклеотидлар белән ябыштырылган ДНК фрагментлары.

Продукция милеге

Ашказаны асты бизе DNase I чүпрә белдерү системасында күрсәтелде һәм чистартылды.

Cкомпонентлар

Транспорт һәм саклау

1. Саклау тотрыклылыгы: - саклау өчен 15 ℃ ~ -25;;

2.Транспорт тотрыклылыгы: боз пакетлары астында транспорт;

3. Тапшырылган: 10 мм Tris-HCl, 2 мм CaCl₂, 50% глицерол, pH 7,6 25 at.

Берәмлек төшенчәсе

Бер агрегат фермент күләме дип билгеләнә, ул 1 µг pBR322 ДНКны 10 минутта 37 ° C температурада киметәчәк.

Сыйфат белән идарә итү

RNase:5U DNase I 1,6 μg MS2 RNA белән 4 сәгатьтә 37 atта агароза гели электрофорезы белән билгеләнгәнчә деградация китерми.

Бактерия Эндотоксин:LAL-тест, Кытай фармакопоя IV 2020 басмасы буенча, гель лимитын сынау ысулы, гомуми кагыйдә (1143).Бактерияле эндотоксин күләме EU10 ЕС / мг булырга тиеш.

Куллану өчен күрсәтмәләр

1. Түбәндә күрсәтелгән пропорцияләр буенча RNaseсыз трубада реакция чишелешен әзерләгез:

2.37 15 15 минутка;

3. Реакцияне туктатыр өчен туктату буферын өстәгез, һәм DNase I-ны активсыз калдыру өчен 65 at 10 минутта җылытыгыз. Ampleрнәк турыдан-туры киләсе транскрипция эксперименты өчен кулланылырга мөмкин.

Искәрмәләр

1. μg РНК өчен 1U DNase I кулланыгыз, яки 1U DNase I 1μg РНКдан азрак.

2. Ферментны инактивлаштыру вакытында РНКны бозылудан саклау өчен, 5 мм соңгы концентрациягә EDEDTA кушылырга тиеш.